Aprèn - Pere Garriga Solé

Resum Introducció: Les opsines són proteïnes integrals de membrana que presenten absorció selectiva per a cada tipus de fotopigment cobrint tot el rang de la visió humana. Una molècula de fotopigment està formada per una opsina més un cromòfor, el derivat de la vitamina A, retinal-11-cis. Les opsines es localitzen en la segona capa de la retina que conté les cèl·lules fotoreceptores cons i bastonets. En aquestes cèl·lules es on es produeix l'absorció de llum que produeix la reacció fotoquímica en el fotopigment que últimament es transmet en forma d'impuls nerviós al cervell. La rodopsina es la proteïna fotoreceptora responsable de la visió escotòpica a baixes intensitats lumíniques. Recentment s'ha vist que la rodopsina pot jugar un paper en el mecanisme molecular d'altres sentits o processos fisiològics. Objectius: L'objectiu del treball és fer una revisió bibliogràfica de les publicacions el més actual possible sobre el tema i una anàlisi crítica de la versemblança dels resultats presentats en aquestes publicacions. Metodologia: S'ha dut a terme una cerca bibliogràfica entre els mesos de febrer 2023 i desembre de 2023 a través de Web of Science. Per fer aquesta cerca hem utilitzat les següents paraules clau ''Opsin”, “Functions”, “Senses”. Resultats: S'han pogut trobar un nombre limitat d'articles que posen de manifest un possible paper primigeni de les opsines en l'evolució molecular d'altres sentits. Aquesta evolució culminaria en el sofisticat mecanisme de la fototransducció visual. En aquest sentit s'ha descrit la relació de les opsines amb d'altres sentits com ara el sentit del gust o el seu possible paper com a sensors de temperatura. Discussió: Els treballs consultats permeten establir que existiria relació entre altres sentits, diferents de la visió, i les opsines. Es tracta però de pocs treballs i que majoritàriament s'han fet amb organismes model com ara la mosca Drosophila melanogaster. Es posa de manifest que calen més estudis.

Resumen Introducción: Las opsinas son proteínas integrales de membrana que presentan absorción selectiva para cada tipo de fotopigmento, cubriendo todo el rango de la visión humana. Una molécula de fotopigmento está formada por una opsina más un cromóforo, el derivado de la vitamina A, retinal-11-cis. Las opsinas se localizan en la segunda capa de la retina que contiene las células fotorreceptoras conos y palillos. En estas células es donde se produce la absorción de luz que produce la reacción fotoquímica en el fotopigmento que últimamente se transmite en forma de impulso nervioso en el cerebro. La rodopsina es la proteína fotorreceptora responsable de la visión escotópica a bajas intensidades lumínicas. Recientemente se ha visto que la rodopsina puede jugar un papel en el mecanismo molecular de otros sentidos o procesos fisiológicos. Objetivos: El objetivo del trabajo es realizar una revisión bibliográfica de las publicaciones lo más actual posible sobre el tema y un análisis crítico de la verosimilitud de los resultados presentados en estas publicaciones. Metodología: Se ha realizado una búsqueda bibliográfica entre los meses de febrero 2023 y diciembre de 2023 a través de Web of Science. Para realizar esta búsqueda hemos utilizado las siguientes palabras clave ''Opsin”, “Functions”, “Senses”. Resultados: Se ha podido encontrar un número limitado de artículos que ponen de manifiesto un posible papel primigenio de las opsinas en la evolución molecular de otros sentidos. Esta evolución culminaría en el sofisticado mecanismo de la fototransducción visual. En este sentido, se ha descrito la relación de las opsinas con otros sentidos como el sentido del gusto o su posible papel como sensores de temperatura. Discusión: Los trabajos consultados permiten establecer que existiría relación entre otros sentidos, distintos de la visión, y las opsinas. Se trata de pocos trabajos y que mayoritariamente se han hecho con organismos modelo como la mosca Drosophila melanogaster.

Summary Introduction: Opsins are integral membrane proteins that present selective absorption for each type of photopigment, covering the entire range of human vision. A photopigment molecule is made up of an opsin plus a chromophore, the vitamin A derivative, 11-cis-retinal. Opsins are located in the second layer of the retina that contains the cone and stick photoreceptor cells. It is in these cells that the absorption of light occurs, producing the photochemical reaction in the photopigment that is ultimately transmitted in the form of a nervous impulse in the brain. Rhodopsin is the photoreceptor protein responsible for scotopic vision at low light intensities. Recently it has been seen that rhodopsin may play a role in the molecular mechanism of other senses or physiological processes. Objectives: The objective of the work is to carry out a bibliographic review of the most current publications on the subject and a critical analysis of the plausibility of the results presented in these publications. Methodology: A bibliographic search was carried out between the months of February 2023 and December 2023 through Web of Science. To carry out this search we have used the following keywords ''Opsin”, “Functions”, “Senses”. Results: A limited number of articles have been found that reveal a possible primary role of opsins in the molecular evolution of other senses. This evolution would culminate in the sophisticated mechanism of visual phototransduction. In this sense, the relationship of opsins with other senses such as the sense of taste or their possible role as temperature sensors has been described. Discussion: The works consulted allow us to establish that there would be a relationship between other senses, other than vision, and opsins. These are few works and have mostly been done with model organisms such as the fly Drosophila melanogaster. It is evident that more studies are needed to confirm this role of opsins in the evolution of senses other than vision.

Biomaterials per a la regeneració corneal

Treball Final de Grau

Ripoll Parella, Abril

Tutor/a - Director/a: Garriga Solé, Pere

Data de publicació: 2020

Facultat d'Òptica i Optometria de Terrassa (FOOT)

Veure detall Accés al text complet

Potenciales beneficios de la quercetina en la salud ocular

Treball Final de Grau

Rus Copado, Ana

Tutor/a - Director/a: Morillo Cazorla, Margarita; Garriga Solé, Pere

Data de publicació: 2019

Facultat d'Òptica i Optometria de Terrassa (FOOT)

Veure detall Accés al text complet

Study on the development of Fosfomycin Trometamol active pharmaceutical ingredient and final granulate dosage form

Projecte Final de Màster Oficial

Míguez Zambrano, Juan Manuel

Tutor/a - Director/a: Garriga Solé, Pere

Data de publicació: 2019

Escola Superior d'Enginyeries Industrial, Aeroespacial i Audiovisual de Terrassa (ESEIAAT)

Accés al text complet

La proteïna fotoreceptora melanopsina i la seva implicació en la regulació dels ritmes circadians i el son

Treball Final de Grau

Rives Solà, Mercè

Tutor/a - Director/a: Garriga Solé, Pere; Morillo Cazorla, Margarita

Data de publicació: 2019

Facultat d'Òptica i Optometria de Terrassa (FOOT)

Veure detall Accés al text complet

Optogenética y posibles terapias para la retinosis pigmentaria

Treball Final de Grau

Sansa Fayos, Marc

Tutor/a - Director/a: Morillo Cazorla, Margarita; Garriga Solé, Pere

Data de publicació: 2019

Facultat d'Òptica i Optometria de Terrassa (FOOT)

Veure detall Accés al text complet

La retinosis pigmentaria (RP) es un grupo clínico y genéticamente heterogéneo de trastornos de la retina hereditarios caracterizados por una disfunción progresiva difusa de fotorreceptores predominantemente bastón, con la posterior degeneración de fotorreceptores de cono y epitelio pigmentario retiniano. La discapacidad visual generalmente se manifiesta como ceguera nocturna y pérdida progresiva del campo visual. Su prevalencia es de 1:3000 a 1:5000. La RP puede verse de forma aislada (RP típica) o en asociación con enfermedad sistémica. El presente trabajo se enfoca en la RP típica con una breve mención de tipos de RP raros pero con posibles opciones terapéuticas y las diferentes formas de abordarlas. Existe una variación considerable en la gravedad clínica de estas afecciones; El tratamiento actual de la RP incluye un intento de desacelerar el proceso degenerativo a través de terapias. Las terapias novedosas incluyen el uso de terapia génica a medida, trasplante de células madre o tratamiento de neuroprotección. Se han explorado muchos tratamientos sin beneficio comprobado para las formas aisladas de RP. Estos incluyen varias vitaminas y minerales, vasodilatadores, terapia de tejidos con extracto placentario, cortisona, simpatectomía cervical, inyecciones de un hidrolizado, factor de transferencia, dimetilsulfóxido, ozono, trasplantes musculares e inyecciones subretinianas de células retinianas fetales. A pesar de estos avances, no existe un tratamiento efectivo disponible en la actualidad Tras una revisión de la literatura actual exhaustiva se ha podido concluir que los recientes avances en la terapia génica y la tecnología de células madre han posicionado el campo al borde de lo que muchos creen que será un gran avance en la estrategia terapéutica. La tecnología de prótesis retiniana ha permitido restaurar la vista a los ojos completamente ciegos sin percepción de luz, una hazaña que hace poco tiempo se veía como imposible. La terapia génica basada en líneas de células madre específicas del paciente y la edición in vivo de genes pueden convertirse en las principales direcciones de la terapia basada en células y la terapia génica. Se espera que las células fotorreceptoras artificiales basadas en aproximaciones optogenéticas compitan con los implantes protésicos.

MATERIALS ÒPTICS (Examen 2n quadrimestre, 2n parcial) Restricted access to the UPC academic community

Examen

Garriga Solé, Pere

Data de publicació: 2019

Facultat d'Òptica i Optometria de Terrassa (FOOT)

MATERIALS ÒPTICS - 370512

Accés al text complet

MATERIALS ÒPTICS (Examen 1r quadrimestre, 2n parcial) Restricted access to the UPC academic community

Examen

Garriga Solé, Pere

Data de publicació: 2018

Facultat d'Òptica i Optometria de Terrassa (FOOT)

MATERIALS ÒPTICS - 370512

Accés al text complet

Efectos del Resveratrol en la salud ocular

Treball Final de Grau

Ballesteros Caldés, María José

Tutor/a - Director/a: Morillo Cazorla, Margarita; Garriga Solé, Pere

Data de publicació: 2017

Facultat d'Òptica i Optometria de Terrassa (FOOT)

Veure detall Accés al text complet

MATERIALS ÒPTICS (Examen 1r quadrimestre, 2n parcial) Restricted access to the UPC academic community

Examen

Garriga Solé, Pere

Data de publicació: 2017

Facultat d'Òptica i Optometria de Terrassa (FOOT)

MATERIALS ÒPTICS - 370612

Accés al text complet

Respuesta del fotopigmento rodopsina a diferentes intensidades lumínicas

Treball Final de Grau

Vélez Vera, Mario

Tutor/a - Director/a: Garriga Solé, Pere; Morillo Cazorla, Margarita

Data de publicació: 2016

Facultat d'Òptica i Optometria de Terrassa (FOOT)

Veure detall Accés al text complet

L'àcid valproic com a potencial agent terapèutic en la retinosi pigmentària: possible interacció amb rodopsina

Treball Final de Grau

Durban Delgado, Jennifer

Tutor/a - Director/a: Garriga Solé, Pere; Morillo Cazorla, Margarita

Data de publicació: 2015

Facultat d'Òptica i Optometria de Terrassa (FOOT)

Veure detall Accés al text complet

Rhodopsin is a glycoprotein formed by a proteic part (opsin) and a non - proteic part (11 - cis - retinal), which is located in the rod outer segment discs . Rods are one of the two kinds of photoreceptors found in the retina, which make vision possible at low light conditions. Retinitis Pigmentosa (RP) are a group of degenerative diseases caused by alterations in rhodopsinstructure, due to genetic mutations. These diseases directly affect night vision and the visual field. Despite an efficient treatment has not been found yet, a recent study (Mahesh et al., 2012) showed that RP patients treated with valproi c acid during a 3 month period increase d their visua l acuity and their visual field. In the present study, this acid has been used as a sodium salt form (sodium valproate), and different parameters have been determined in vitro , including rhodopsin therm al stability at different temperatures and different concentrations; rhodopsin regeneration; rhodopsin behaviour to wards acidification; and rhodopsin aromatic amino acid s fluorescence. All these parameters have been measured in the presence and in the absence of sodium valproate. The results obtained show th at sodium valproate reduces rhodopsin regeneration time, a s well as the regeneration percentage . Also, due to sodium valproate, rhodopsin releases the retinal faster in fluorescence tests. In contrast , it does not a ffect in such a significant way rhodopsin therm al stability and its behaviour to acidification.

La rodopsina es una glicoproteína formada por una parte proteica (opsina) y una parte no proteica (11 - cis - retinal) . S e localiza e n los discos de los segmentos externos de los bastones, uno de los 2 tip o s de fotoreceptores que se encuentran en la retina y hacen posible la visión con poca luz. Las retinosis pigmentarias (RP), son enfermedades degenerativas causadas por alteraciones e n la estructura de la rodopsina debidas a mutaciones genéticas. Estas enfermedades se caracterizan por la afectación en la visión nocturna y el campo visual. Actualmente, todavía no se ha encontrado un tratamiento efectivo , pero un estudio reciente (Mahes h et al., 2012) indica que la administración de ácido valproico durante 3 meses a pacientes con retinosis pigmentarias les ha hecho aumentar la agudeza visual y el campo visual. En el presente estudio se ha trabajado con este ácido en forma de sal sódica ( valproato sódico ), y se ha determinado in vitro la estabilidad térmica de la rodopsina a diferentes temperaturas y concentraciones , así c omo la regeneración de la proteína , su comportamiento al acidificar y la posible variación en la fluorescencia de los aminoácidos aromáticos presentes en la rodopsina, tanto en ausencia como en presencia de valproato sódico . Los resultados obtenidos muestran que el valproato sódico causa una regeneración más rápida y en un mayor porcentaje de la rodopsina, además de hace r que ésta libere más rápidamente el retinal en los experimentos de fluorescencia, aunque no influye de manera tan significativa en la estabilidad térmica y la acidificación de la rodopsina .

La rodopsina és una glicoproteïna formada per una part proteica (opsina) i una part no proteica (11 - cis - retinal). E s localitza als discs del s segments externs dels bastons, un dels 2 tipus de fotoreceptors que es troben a la retina i que fan possible la visió a mb poca llum. Les retinosis pigmentàries (RP) són malalties degeneratives causades per alteracions en l'estructura de la rodopsina degudes a mutacions genètiques. Aquestes malalties es caracteritzen per l'afectació en la visió nocturna i el camp visual. A ctualment , encara no s'ha trobat un tractament efectiu , però un estudi recent (Mahesh et al., 2012) indica que l'administració d ' àcid valproic durant 3 mesos a pacients amb RP el s ha fet augmentar l' agudesa visual i el camp visual . En el present estudi s 'ha treballat amb l' àcid valproic en forma de sal sòdica ( valproat de sodi ), i s'ha determinat in vitro l'estabilitat tèrmica de la rodopsina a diferents temperatures i concentracions , així com la regeneració de la proteïna , el seu comportament a l ' acidi ficar i la possible variació en la fluorescència dels aminoàcids aromàtics presents a la rodopsina , tant en abs ència com en presència de valproat de sodi . Els resultats obtinguts mostren que el valproat de sodi fa que la rodopsina regeneri més ràpid i en un percentatge més alt , i alliberi més ràpid el retinal en els experiments de fluorescència, tot i que no influeix de manera tan significativa en l 'estabilitat tèrmica i el comportament a l' acidifica r .

Interacción de la catequina y del ácido cafeico con la rodopsina

Treball Final de Grau

García Pérez, Laura

Tutor/a - Director/a: Garriga Solé, Pere; Morillo Cazorla, Margarita

Data de publicació: 2015

Facultat d'Òptica i Optometria de Terrassa (FOOT)

Veure detall Accés al text complet

En este proyecto se ha estudiado la posible interacción de la rodopsina con dos compuestos fenólicos: un flavonoide, la catequina y un ácido fenólico, el ácido cafeico. Los fenoles y flavonoides son sustancias que se encuentran en alimentos de nuestra dieta diaria como las frutas y las verduras. Proporcionan colores a las plantas y las protegen de los rayos UV. Tienen propiedades antioxidantes, antiinflamatorias, antivirales, y antifúngicas que los hacen beneficiosos para nuestra salud, pudiendo prevenir enfermedades degenerativas y trastornos de la edad, así como también inhibir el crecimiento de células cancerígenas, entre otros efectos. Respecto a la salud ocular, la catequina podría prevenir la formación de cataratas, protegiendo al cristalino de los rayos UV, y por otro lado la actividad antiangiogénica del ácido cafeico podría proteger frente a patologías retinianas como la DMAE y la retinopatía diabética. En este estudio se han utilizado muestras de rodopsina solubilizada, extraída de retinas bovinas, hidrato de catequina y ácido cafeico para realizar experimentos in vitro de estabilidad térmica y de regeneración del pigmento visual rodopsina. Mediante espectrofotometría de absorción UV-visible se ha podido determinar que el ácido cafeico puede aumentar la estabilidad de la rodopsina, y tanto la catequina como el ácido cafeico mejorarían la regeneración de la rodopsina a partir de opsina y retinal. Estos resultados sugieren un papel beneficioso de estos compuestos a nivel molecular de las células fotorreceptoras. Se requerirían estudios adicionales para confirmar estos efectos, y su posible extrapolación in vivo.

En aquest projecte, s'ha estudiat la possible interacció de la rodopsina amb dos compostos fenòlics: un flavonoide, la catequina i un àcid fenòlic, l'àcid cafeic. Els fenols i flavonoides són substancies que es troben en aliments de la nostra dieta diària com les fruites i les verdures. Proporcionen colors a les plantes i les protegeixen dels raigs UV. Tenen propietats antioxidants, antiinflamatòries, antivirals, i antifúngiques que els fan beneficiosos per a la nostra salut, prevenint malalties degeneratives i trastorns de l'edat, així com també inhibir el creixement de cèl·lules cancerígenes, entre d'altres efectes. Respecte a la salut ocular, la catequina podria prevenir la formació de cataractes, protegint al cristal·lí del raig UV, i per un altre banda l'activitat antiangiogènica de l'àcid cafeic podria protegir en front a patologies retinianes com la DMAE i la retinopatia diabètica. En aquest estudi s'han utilitzat mostres de rodopsina solubilitzada, extreta de retines bovines, hidrat de catequina i àcid cafeic per realitzar experiments in vitro d'estabilitat tèrmica i de regeneració del pigment visual rodopsina. Mitjançant espectrofotometria d'absorció UV-visible s'ha pogut determinar que l'àcid cafeic pot augmentar l'estabilitat de la rodopsina, i tant la catequina com l'àcid cafeic millorarien la regeneració de la rodopsina a partir d'opsina i retinal. Aquest resultats suggereixen un paper beneficiós d'aquests compostos a nivell molecular de les cèl·lules fotoreceptores. Es requeririen estudis addicionals per confirmar aquests efectes, i la seva possible extrapolació in vivo.

In this project we have studied the possible interaction of rhodopsin with two phenolic compounds: a flavonoid such as catechin and a phenolic derivative like caffeic acid. Phenols and flavonoids are found in foods really common in our daily diet like fruits and vegetables. They provide color to plants and protect them from UV rays at the same time. Flavonoids are known to have antioxidant, anti-inflammatory, antifungal and antiviral properties, which make them beneficial to human health. Phenolic compounds are associated with a reduced risk of major agerelated diseases, as well as inhibition of the growth of cancer cells, among other effects. In visual health, catechin could prevent the formation of cataracts protecting the crystallin lens against UV rays. On the other side, the antiangiogenic activity of caffeic acid could protect us against retinal diseases like AMD and diabetic retinopathy. In this study, we used solubilized rhodopsin samples extracted from bovine retinas, catechin and caffeic acid to perform in vitro experiments on the thermal stability and regeneration of the rhodopsin visual pigment. By means of UV-visible absorption spectrophotometry it has been found that caffeic acid can increase the stability of rhodopsin, and both catechin and caffeic acid would improve the regeneration of rhodopsin from opsin and retinal. These results suggest a beneficial role of these compounds at the molecular level of the photoreceptor cells. Additional studies are needed to confirm these effects, and their possible in vivo extrapolation.

Influència d'oligoelements sobre l'estructura i funció de proteïnes implicades en la fototransducció visual

Treball Final de Grau

Montiel Capuz, Jose Mª

Tutor/a - Director/a: Garriga Solé, Pere; Morillo Cazorla, Margarita

Data de publicació: 2014

Facultat d'Òptica i Optometria de Terrassa (FOOT)

Veure detall Accés al text complet

Obtención de receptores muscarínicos de acetilcolina recombinantes involucrados en patologías neurodegenerativas

Projecte Final de Màster Oficial

Martínez Sánchez, Luz del Carmen

Tutor/a - Director/a: Garriga Solé, Pere

Data de publicació: 2014

Escola Tècnica Superior d'Enginyeria Industrial de Barcelona (ETSEIB)

Veure detall Accés al text complet

Recientemente se han logrado grandes avances en la determinación de la estructura y función de los receptores acoplados a proteínas G (GPCR's). Los GPCR´s constituyen gran familia de proteína integrales de membrana y se encuentran implicados en una gran variedad de procesos fisiológicos como la respuesta a hormonas y neurotransmisores, así como también son centrales en los sistemas sensoriales mediando las respuestas en los sentidos de la vista, olfato y el gusto. Entre ellos se encuentra la familia de los receptores muscarínicos de acetilcolina, compuesta por 5 subtipos de receptores (M1-M5), los cuales modulan la mayor parte de las acciones del neurotransmisor acetilcolina en el sistema nervioso central y en el sistema nervioso periférico. Los receptores muscarínicos han jugado un papel muy relevante en la compresión del funcionamiento de la neurotransmisión. En este trabajo nos centraremos únicamente en los receptores M1 y M3 debido a su potencial participación en el mecanismo molecular de la enfermedad de Alzheimer Hasta ahora se ha visto que estos receptores se encuentran implicados en varias patologías del sistema nervioso central, ya que modulan la señalización de diferentes sistemas neurotransmisores. Estos sistemas se ven alterados como en el caso de la enfermedad de Alzheimer, donde se ha visto que modulan la degradación de la APP (proteína precursora de amiloide) por la α-secretasa y de esta forma evitan la formación de las placas neuríticas conocidas como β-amiloides (Aβ) características de esta enfermedad. Además se ha sugerido que como resultado de su interacción con la proteína tau, pueden jugar un papel muy relevante en la pérdida de neuronas colinérgicas a través de un mecanismo que involucra la interacción intracelular y extracelular de la proteína tau con los receptores muscarínicos M1/M3 presentes en este tipo de neuronas. El objetivo de este trabajo es comprender y analizar detalladamente las propiedades biológicas y bioquímicas de las diferentes isoformas de la proteína tau (ya sean fragmentos o la proteína completa soluble) así como las posibles interacciones que puedan tener con los receptores muscarínicos en relación a su implicación con el Alzheimer. Para ello, el principal logro ha sido optimizar las metodologías de expresión y purificación de la proteína tau. Ello ha permitido, por primera vez en nuestro grupo, la obtención de la proteína tau purificada, así como también la obtención de los receptores muscarínicos mediante su expresión en líneas celulares apropiadas.

El receptor acoplado a proteína G de galanina (GalR1) y su implicación en la depresión: expresión y caracterización

Projecte Final de Màster Oficial

Rivera Rodríguez, Diana Marcela

Tutor/a - Director/a: Garriga Solé, Pere

Data de publicació: 2013

Escola Tècnica Superior d'Enginyeria Industrial de Barcelona (ETSEIB)

Veure detall Accés al text complet

Aunque la fisiopatología de la depresión aún no está completamente clara, se sabe que implica perturbaciones en la transmisión monoaminérgica en el cerebro. Los actuales fármacos antidepresivos limitan su eficacia terapéutica a una serie de pacientes, y están ligados a efectos secundarios serios. Con miras a ampliar los agentes terapéuticos, los estudios recientes sugieren que la existencia de dimerización entre los receptores de galanina (GalR1) y serotonina (5HT-1A), pueden ser relevantes en los trastornos del estado de ánimo. A nivel fisiológico la galanina es coexpresada con la serotonina, participando en sus procesos de modulación, mediante receptores acoplados a proteínas G entre los cuales se destaca el receptor GalR1 y sus rutas de señalización intracelular (Gi/0). En este trabajo se han co-expresado el GalR1 y el 5HT-1A en células HEK 293T para evaluar su posible interacción mediante la técnica de FRET. Los resultados obtenidos confirman la heterodimerización entre los dos receptores, presentando eficiencias de FRET de alrededor del 48,5% cuando las células fueron transfectadas con 1μg de 5HT-1A-pCFP y variando la cantidad de GalR1-pYFP (0,5μg-4μg). Así mismo se observó una disminución en la eficiencia (≈42%) al someter a las células co-transfectadas a concentraciones de 200μM, 300μM y 400μM de ZnCl2. Debido a su gran importancia como diana terapéutica, se purificó el receptor GalR1 mediante cromatografía de inmunoafinidad utilizando los detergentes DM, CHAPS y OGP como eluyentes y su estado conformacional fue evaluado usando espectroscopia de fluorescencia (fluorescencia intrínseca del triptófano). A pesar de la presencia del receptor y la evidencia de un red-shift en todas las muestras, la proteína purificada con DM mostró un desplazamiento más lento y gradual en la λMAX de emisión (1nm-2nm) tras la adición de DTT (200μM-1500μM) y urea (8mM) que los otros detergentes, sugiriendo que el DM proporciona un ambiente más flexible y por ende una mayor estabilidad al receptor. Por otra parte, mediante la sobre-expresión en E. coli de la proteína quimera transducina (Gαt/i1) como modelo, se establecieron las condiciones de inducción óptimas (IPTG 30μM, 16h at 23ºC) y se continuó con su exitoso aislamiento y purificación mediante cromatografía de afinidad (prodominio de subtilisina) con el objetivo principal de utilizar estas técnicas como métodos estandarizados y poder expresar, aislar y purificar la subunidad α de la proteína Gi1 mediante la clonación su gen en el vector PG58-prodominio para llevar a cabo, en futuras investigaciones, ensayos funcionales (galanina-GALR1-Gi).